Υπάρχουν διάφορα είδη χρωματογραφίας όπως Χρωματογραφία Χαρτιού, Χρωματογραφία Στήλης, Χρωματογραφία Αερίου, Επίπεδη Χρωματογραφία, Χρωματογραφία Συνάφειας, Χρωματογραφία Λεπτής Στρώσης και Χρωματογραφία Υγρού.
Η υγρή χρωματογραφία είναι μια τεχνική που χρησιμοποιείται σε εργαστήρια για τον διαχωρισμό διαλυμένων μορίων ή ιόντων σε υγρή φάση. Η διαδικασία ξεκίνησε στα μέσα του 19ου αιώνα όταν χρησιμοποιήθηκε κυρίως για τον διαχωρισμό της χλωροφύλλης σε φυτικές χρωστικές. Από τότε, αυτή η διαδικασία αναπτύχθηκε από τον Mikhail Semyonovich Tsvet, έναν Ρώσο βοτανολόγο που χρησιμοποίησε στήλες ανθρακικού ασβεστίου στις αρχές του 20ού αιώνα.
Υπάρχουν διάφορα είδη χρωματογραφίας όπως Χρωματογραφία Χαρτιού, Χρωματογραφία Στήλης, Χρωματογραφία Αερίου, Χρωματογραφία Επίπεδου, Χρωματογραφία Συνάφειας, Χρωματογραφία Λεπτής Στρώσης και Χρωματογραφία Υγρού. Αυτό το άρθρο θα ερευνήσει τις λεπτομέρειες σχετικά με το τελευταίο που συνήθως αναφέρεται σήμερα ως Υγρή Χρωματογραφία Υψηλής Πίεσης.
Υγρή χρωματογραφία αντίστροφης φάσης
Υπάρχουν δύο υπότυποι αυτής της διαδικασίας που είναι γνωστοί ως η υγρή χρωματογραφία κανονικής φάσης (NPLC) όπου η στατική φάση είναι πιο πολική από την κινητή φάση. Ο άλλος δευτερεύων τύπος είναι η υγρή χρωματογραφία αντίστροφης φάσης (RPLC) όπου η κινητή φάση είναι πιο πολική. Αυτός ο τύπος είναι επίσης η πιο συχνά χρησιμοποιούμενη τεχνική διαχωρισμού στις μέρες μας.
Η διαδικασία υγρής χρωματογραφίας παίρνει το υγρό υποκείμενο σε μια στήλη που είναι γεμάτη με σωματίδια που έχουν σφαιρικό ή ακανόνιστο σχήμα ή πορώδες μονολιθικό στρώμα χρησιμοποιώντας πολύ υψηλή πίεση. Χρησιμοποιεί πολύπλοκα όργανα για να αντλήσει το υγρό δείγμα μέσω μιας αντλίας για να παρέχει ταχύτερο χρόνο ανάλυσης και υψηλότερη ανάλυση. Όταν κάνετε τη διαδικασία, είναι απαραίτητο να προσδιορίσετε ποιον τρόπο διαχωρισμού θα χρησιμοποιήσετε. Γενικά, τα αδιάλυτα στο νερό ή μη πολικά δείγματα χρησιμοποιούν την κανονική φάση, ενώ τα διαλυτά δείγματα λαμβάνουν την αντίστροφη φάση. Συνήθως, οι ειδικοί εργαστηρίου λαμβάνουν υπόψη ορισμένους παράγοντες κατά την επιλογή των διαλυτών που θα χρησιμοποιηθούν. Η αντοχή του διαλύτη βασίζεται σε κλίμακες πυριτίας ή αλουμίνας και στον δείκτη πολικότητας του διαλύτη. Οι πιο συνηθισμένοι διαλύτες αντίστροφης φάσης είναι μεθανόλη, ακετονιτρίλιο, τετραϋδροφουράνιο και νερό. Αυτοί οι διαλύτες έχουν χαμηλό ιξώδες, διαφάνεια UV και είναι αναμίξιμοι μεταξύ τους.
Ο άλλος δευτερεύων τύπος είναι η υγρή χρωματογραφία αντίστροφης φάσης (RPLC) όπου η κινητή φάση είναι πιο πολική.
Αφού εξετάσετε ποιον τύπο θα χρησιμοποιήσετε - κανονική χρωματογραφία ή αντίστροφη - το επόμενο βήμα είναι να φορτώσετε το μείγμα στην κορυφή της στήλης ακολουθούμενο από περισσότερο διαλύτη. Τα διαφορετικά συστατικά του μίγματος δείγματος περνούν από αυτήν τη στήλη σε διαφορετικούς ρυθμούς λόγω διαφορών στη συμπεριφορά διαμέρισής τους μεταξύ της κινητής υγρής φάσης και της στατικής φάσης.
Η θερμοκρασία επηρεάζει την υγρή χρωματογραφία
Δεδομένου ότι οι μεταβολές στη θερμοκρασία επηρεάζουν την υγρή χρωματογραφία σε ελάχιστη κλίμακα σε αντίθεση με άλλες μεθόδους χρωματογραφίας, οι διαβαθμίσεις βαθμίδωσης έχουν χρησιμοποιηθεί για τη μείωση του χρόνου ανάλυσης και τη βελτίωση της συνολικής ανάλυσης του μείγματος. Ωστόσο, δεν μπορούν όλες οι μέθοδοι υγρής χρωματογραφίας να κάνουν χρήση διαβάθμισης διαβάθμισης καθώς οι διαχωρισμοί υγρού-προς-υγρό τείνουν να έχουν ασταθή αποτελέσματα, ενώ οι εξαιρέσεις μεγέθους δεν δείχνουν καθόλου καλά αποτελέσματα. Οι μέθοδοι ανταλλαγής ιόντων μαζί με τις μεθόδους προσρόφησης και συνδεδεμένης φάσης χρησιμοποιούν διαχωριστικές βαθμίδες πολύ καλά.
Η υγρή χρωματογραφία χρησιμοποιείται συχνότερα σε προπαρασκευαστικές εργαστηριακές εργασίες για τον καθαρισμό και την απομόνωση ορισμένων συστατικών ενός μείγματος. Όπου υπάρχουν μικρές στήλες μιας χρήσης, υγρή χρωματογραφία χρησιμοποιείται επίσης σε τέτοιους διαχωρισμούς ιχνών.
Σήμερα, η υγρή χρωματογραφία χρησιμοποιείται συνήθως ως τρόπος δοκιμής δειγμάτων νερού για επιβλαβείς ρύπους και ρύπανση των υδάτων. Οι επιστήμονες βρίσκουν ακόμα τρόπους για να βελτιώσουν αυτόν τον τομέα, αν και η τρέχουσα ανθρώπινη κατανόηση αυτής της τεχνολογίας θεωρείται επαρκής για να διαδραματίσει τον ρόλο της στην εφαρμογή της πραγματικής ζωής.
